Efteruddannelse i Bioteknologi Kursus A Genomisk DNA
Kursus indhold
Isolering af genomisk DNA Dyrk eller indsaml celler/væv Riv væv og lyser celler med kemiske, enzymatiske eller fysiske metoder Fjern cellerester Fjern resterende proteiner Isoler gDNA Koncentrer DNA Analyser for koncentration og renhed
Åbning af væv og celler
Lysis af celler Lysisbuffer: Buffer (puffer) EDTA Detergent SDS Sarcocyl Triton X-100 CTAB (cetyl trimethyl ammonium bromid) PVP (polyvinylpyrrolidon) Protease RNAse
Isolering af DNA Silica-baseret isolering Silica Diatomert jord Glas Glasfiberfilter Chaotropisk salt Guanidinium hydrochlorid Guanidinium thiocyanat Natriumiodid Natriumperchlorat Ammoniumsulfat Vaskeopløsning KPO4 pH 8.0 + 80% EtOH
Isolering af DNA Ionbytning på minikolonne Ekstraktion med organisk opløsningsmidler Phenol Phenol/chloroform Chloroform Diethylether
Koncentrering af DNA opl. Fældning pH 4 Høj [salt] NaCl KAc NaAc Ethanol eller isopropanol -20°C
Koncentration og renhed Absorbans ved 260nm (OD260 ≈ A260) A260 = 1 => [DNA]= 50µg/mL Renhed A260:A280 = 1,8 => rent DNA A260:A280 < 1,8 => DNA forurenet med protein A260:A280 > 1,8 => DNA forurenet med RNA
Agarosegelelektroforese
Gennemgang af forsøgsvejledning Se i mappen