Efteruddannelse i Bioteknologi Kursus A PCR af gDNA
Kursus indhold
PCR af plante gDNA Baseret på kittet: GAPDH/PCR Module PCR: http://www3.bio-rad.com/LifeScience/jobs/2004/04-0522/04-0522_PV92_PCR.html
PCR
PCR
PCR
PCR
GAPDH Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase
Flere gener for ”samme” enzym
GAPDH GAPDH katalyserer reaktionen: Glyceraldehyde-3-phosphate + NAD+ + Pi 1,3-bisphosphoglycerate + NADH + H+
I Arabidopsis
GAPDH tetramer
Primer design
Primer design Længde Smelte temperatur Tm Annealing temperatur Tm = 2°C· (A+T) + 4°C· (G+C) Annealing temperatur Primer hairpins Primer dimers GC-clamp
PCR kloning
Degenerede primere Kendte sekvenser Nye homologe gener med næsten ens sekvenser Primere som næsten passer Blandet population af primere
Primer design
Primer design
Primer design
Exonukleasebehandling Nedbrydning af primere fra 1. runde PCR Enkeltstrengs nuklease Dobbeltstrenget PCR-fragment overlever
Nestede primere
Nestede primere
Gennemgang af forsøgsvejledning Se i mappen