Præsentation er lastning. Vent venligst

Præsentation er lastning. Vent venligst

Efteruddannelse i Bioteknologi

Lignende præsentationer


Præsentationer af emnet: "Efteruddannelse i Bioteknologi"— Præsentationens transcript:

1 Efteruddannelse i Bioteknologi
Kursus A Genomisk DNA

2 Kursus indhold

3 Isolering af genomisk DNA
Dyrk eller indsaml celler/væv Riv væv og lyser celler med kemiske, enzymatiske eller fysiske metoder Fjern cellerester Fjern resterende proteiner Isoler gDNA Koncentrer DNA Analyser for koncentration og renhed

4

5 Åbning af væv og celler

6 Lysis af celler Lysisbuffer: Buffer (puffer) EDTA Detergent
SDS Sarcocyl Triton X-100 CTAB (cetyl trimethyl ammonium bromid) PVP (polyvinylpyrrolidon) Protease RNAse

7 Isolering af DNA Silica-baseret isolering Silica Diatomert jord Glas
Glasfiberfilter Chaotropisk salt Guanidinium hydrochlorid Guanidinium thiocyanat Natriumiodid Natriumperchlorat Ammoniumsulfat Vaskeopløsning KPO4 pH % EtOH

8 Isolering af DNA Ionbytning på minikolonne
Ekstraktion med organisk opløsningsmidler Phenol Phenol/chloroform Chloroform Diethylether

9 Koncentrering af DNA opl.
Fældning pH 4 Høj [salt] NaCl KAc NaAc Ethanol eller isopropanol -20°C

10 Koncentration og renhed
Absorbans ved 260nm (OD260 ≈ A260) A260 = 1 => [DNA]= 50µg/mL Renhed A260:A280 = 1,8 => rent DNA A260:A280 < 1,8 => DNA forurenet med protein A260:A280 > 1,8 => DNA forurenet med RNA

11 Agarosegelelektroforese

12 Gennemgang af forsøgsvejledning
Se i mappen


Download ppt "Efteruddannelse i Bioteknologi"

Lignende præsentationer


Annoncer fra Google