Download præsentationen
1
Efteruddannelse i Bioteknologi
Kursus A Genomisk DNA
2
Kursus indhold
3
Isolering af genomisk DNA
Dyrk eller indsaml celler/væv Riv væv og lyser celler med kemiske, enzymatiske eller fysiske metoder Fjern cellerester Fjern resterende proteiner Isoler gDNA Koncentrer DNA Analyser for koncentration og renhed
5
Åbning af væv og celler
6
Lysis af celler Lysisbuffer: Buffer (puffer) EDTA Detergent
SDS Sarcocyl Triton X-100 CTAB (cetyl trimethyl ammonium bromid) PVP (polyvinylpyrrolidon) Protease RNAse
7
Isolering af DNA Silica-baseret isolering Silica Diatomert jord Glas
Glasfiberfilter Chaotropisk salt Guanidinium hydrochlorid Guanidinium thiocyanat Natriumiodid Natriumperchlorat Ammoniumsulfat Vaskeopløsning KPO4 pH % EtOH
8
Isolering af DNA Ionbytning på minikolonne
Ekstraktion med organisk opløsningsmidler Phenol Phenol/chloroform Chloroform Diethylether
9
Koncentrering af DNA opl.
Fældning pH 4 Høj [salt] NaCl KAc NaAc Ethanol eller isopropanol -20°C
10
Koncentration og renhed
Absorbans ved 260nm (OD260 ≈ A260) A260 = 1 => [DNA]= 50µg/mL Renhed A260:A280 = 1,8 => rent DNA A260:A280 < 1,8 => DNA forurenet med protein A260:A280 > 1,8 => DNA forurenet med RNA
11
Agarosegelelektroforese
12
Gennemgang af forsøgsvejledning
Se i mappen
Lignende præsentationer
© 2024 SlidePlayer.dk Inc.
All rights reserved.