Henrik Hansen lektor, cand. scient Bioanalytikeruddannelsen, Institut for Teknologi Indsæt dato 1. Vælg Indsæt i topmenuen 2. Vælg Sidehoved og Sidefod 3. Sæt hak i Dato og klokkeslæt 4. Indsæt dato i feltet Fast 5. Vælg Anvend på alle Vælg layout/design 1. Højreklik på dit slide i venstremenuen 2. Vælg et passende layout fra “layout” menuen, der er fx 4 foskellige forsider at vælge imellem Alternativt kan du vælge vælge layout direkte under knappen Nyt dias, når du laver et nyt slide Biokemisk monitorering af nye blodfortyndende lægemidler ved livstruende blødning

Indhold Bioanalytikeruddannelsen, Institut for Teknologi Henrik Hansen Baggrund Formål og mål Resultater Konklusion Perspektivering

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Baggrund I Danmark er ca patienter i forebyggende eller terapeutisk behandling for blodpropsrelateret sygdom, bl.a. pga. atrieflimmer og venøs trombose. Side 3

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Baggrund Kroppens evne til at standse en blødning afhænger af Blodkarrenes beskaffenhed Antal af funktionsdygtige blodplader (thrombocytter) Et system af proteiner kaldet Koagulationssystemet En overreaktion kan medfører blodpropdannelsen Den blodfortyndende behandling er rettet mod en hæmning af bl.a. koagulationssystemet Side 4

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Baggrund Koagulationssystemet og den blodfortyndende behandling Og derved standsning af blødning Traditionelle behandling: Nedsætter dannelsen af nogle af faktorerne Nye direkte hæmmere: Hæmmer faktorerne direkte Side 5

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Baggrund – behov for monitorering Ved Warfarin behandling kan effekten på blodstørkningen variere hos den enkelte patient bl.a. pga. fødens indhold af K vitamin. Derfor er der behov for løbende at følge patientens blodstørkningsevne – da der ved overdosering er risiko for livstruende blødninger Side 6

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Baggrund – behov for monitorering Behandlingseffekten med Dabigatran varierer ikke på samme måde hos den enkelte patient, så behovet for at følge behandlingen er ikke tilsvarende påkrævet. Dog kan bl.a. en nedsat nyrefunktion øge koncentrationen af Dabigatran i blodet, og derved give risiko for overdosering og blødninger. Der er også rapporteret om tilfælde med overdosering og dødelige blødninger i Region Hovedstaden. Der er derfor vigtigt at kunne påvise overdosering tidligt og sætte ind med korrekt behandling. Side 7

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Baggrund – Biokemiske analyser til monitorering Clot-assays bruges på hospitalslaboratorierne til at monitorere blodfortyndende behandling. De bestemmer tiden fra patientens plasma aktiveres til det størkner (danner clot) Denne koagulationstid afhænger af mængden af funktionsdygtige koagulationsfaktorer og er dermed et mål for behandlingens effekt på blodets størkning Eksempler på sådanne analyser er APTT og INR samt HTI Side 8

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Baggrund – Biokemiske analyser til monitorering Flere undersøgelser har vist at APTT og INR har en relativ lav eller ingen følsomhed overfor Dabigatran. Kromatografiske analyser, f.eks. LC-MS/MS, betragtes i litteraturen som den mest korrekte måde at bestemme koncentrationen af lægemidler i plasma. Udstyret er dog ikke tilgængelig på rutine-hospitalslaboratorier. Så andre mere tilgængelige analyser, der indirekte kan estimere koncentrationen af Dabigatran ønskes. Her har clot-analysen HTI vist sig at være en mulig kandidat. Om HTIs indirekte bestemmelse af Dabigatrankoncentrationen svarer til den reelle koncentration hos patienter i behandling er dog ikke meget undersøgt. Side 9

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Formål og Mål Formål er at etablere og validere biokemiske analyser til monitorering af blod- fortyndende behandling, så analyserne kan implementeres og tolkes i Region Hovedstaden ifm. nye behandlingsprincipper. Mål: - At etablere en LC-MS/MS analyse til at bestemme Dabigatran koncentrationen i humant plasma? - At identificere det mest hensigtsmæssige assay, der med tilstrækkelig sensitivitet og specificitet kan monitorere evt. overdosering med Dabigatran hos patienter i behandling? - At beskrive en model (nomogram) for sammenhængen mellem stofkoncentrationen af Dabigatran og dets blodfortyndende effekt i humant plasma? Projektet er et samarbejde mellem PH Metropol og Biokemisk afdeling, Diagnostisk Center, Rigshospitalet og involverer bachelorstuderende Side 10

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Resultater – intern kontrol Intern kontrol, Dabigatran analog [Dabigatran C6] Side 11

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Resultater – Intermediær præcision Analysering af Dabigatran kontroller (QC1 og QC2) på LS-MS/MS: Et eksempel Side 12 QC 1: 110 μg/L, [60-160] 120,5 116,3 116,8 120,4 114,5 109,7 108,2 Middel115,2 SD4,5 CV%3,9 QC 2: 310 μg/L, [ ] 305,3 282,2 290,4 296,3 297,2 303,2 290,5 Middel295,0 SD7,4 CV%2,5

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Analysering af plasmaprøver med varierende kendte koncentrationer af Dabigatran: Analysering af kontroller (QC 1 og QC2) med kendte Dabigatran koncentrationer: Resultater – korrekthed/akkuratesse Side 13

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Resultater – korrekthed/akkuratesse Forurening af indkøbte Dabigatran? Side 14

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Resultater – Sammenhæng ml LS-MS/MS og HTI Plasmaprøver fra 15 patienter i Dabigatran behandling uden igangværende blødning Analyseret for Dabigatran vha. hhv. LC-MS/MS og HTI. Side 15

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Konklusion Det er muligt at opnå acceptable bestemmelser af Dabigatrankoncentrationen på LC-MS/MS der er dog behov for en yderligere validering af analyseudstyret Der ses en rimelig sammenhæng mellem plasmakoncentrationen af Dabigatran og effekten på blodet størkningsevne bestemt på hhv. LC-MS/MS og HTI der er dog behov for yderligere undersøgelser af patienter med pågående blødning for at kunne etablere et nomogram til klinisk brug. Side 16

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Projektets relevans Dabigatran blev godkendt i Danmark i august I marts 2012 blev Dabigatran sat i forbindelse med 4 dødsfald I 2013 er tallet op på 6 døde og Dabigatran er sat i forbindelse med 47 tilfælde af alvorlige bivirkninger. 2014: Yderligere 2 døde af massive blødninger ifm. operation TV2: ” Patientombuddet advarer: To døde af farlig medicin” BT: ” Sundhedsstyrelsen: Mindst seks er tidligere døde af den farlige medicin”

Bioanalytikeruddannelsen, ITE Henrik Hansen Tak til Fra Klinisk Biokemisk afdeling, Diagnostisk Center, Rigshospitalet: Professor, overlæge, dr.med. Jens Peter Gøtze Bioanalytikerunderviser Kathrine Overgaard Foss Jensen samt afdelingens faglige eksperter. Fra Bioanalytikeruddannelsen: Tidligere bioanalytikerstuderende Pernille Schandorph Tidligere bioanalytikerstuderende Durita av Reyni Lektor, cand. scient. Søren Frank Jørgensen Side 18