Download præsentationen
Præsentation er lastning. Vent venligst
Offentliggjort afEmilie Nygaard Redigeret for ca. et år siden
1
Screening Automation Technologies
2
Automatiseret HTS Behov for automatisering af HTS Fordele og problemer Nødvendigt udstyr for automatisering Detekteringsmetoder i automatiseret HTS Robotstyring
3
Behov for automatisering af HTS Større og større libraries
4
Behov for automatisering af HTS 24,2 targets pr. laboratorium i 2005 ▫G-protein koblede receptorer, kinaser, ionkanaler Screener 792.000 brønde mod hver target Dvs. screening af 19 millioner brønde om året pr. laboratorium (2005) Stiger med 20 % om året 50.000 brønde om dagen (2005) 1 brønd 1 datapunkt Meget data! HTS Ultra HTS: 10.000 > 100.000 brønde/dag
5
Nye teknologier i HTS Virksomheder koncentrerer sig især om ▫Forbedret datakvalitet ▫Større succesrate Nye teknologier ▫Nye screeningsmetoder ▫Simplere metoder ▫Teknologier til nye targetklasser
6
Fordele ved automatiseret HTS Hurtigere Kan screene større libraries Mindre personale (Skal omskoles) Reproducerbare resultater Større sikkerhed Screening i optimalt miljø Miniaturization: mindre reagent og target, færre plader
7
Forskellige screeningsstrategier Screeningsstrategier ▫Random library screening: Alle compounds i library ▫Focused library screening: Delmængde af library ▫Virtual library screening Virtual library screening ▫Forudsiger affinitet mellem compound og target Rummelig struktur af target Virtuel samling af compounds
8
Udstyr til automatiseret HTS - microplates Standardiserede mål Automatiseret HTS Automatiseret HTS Flere brønde pr. plade Antal brøndeArbejdsvolumen (µL) 96100 – 300 3845 – 100 15361 – 10 34560,2 – 3
9
Udstyr til automatiseret HTS – liquid handling tools Pin tools ▫V afhængig af spidsens overfladeareal ▫Ulemper: Variation i V, kontakt ▫Fordele: Enkelt, billig, tætte brønde, små V Luft og positiv forskydning (pipetter) ▫Luftmellemrummet må ikke være for stort ▫Ulemper: Dyrere, Større V ▫Fordele: Præcise, Bredt arbejdsområde Peristaltisk overflytning Kapillar-hævert Piezoelektrisk overflytning
10
Udstyr til automatiseret HTS – liquid handling tools Typisk assay sammensættes af 2-5 komponenter Compounds: Fra stock i DMSO, <50 nL Handling toolVolumen Pin tools5 – 500 nL Luft- og positiv forskydning 250 nL – 1 mL Peristaltisk overflytning> 1 µL Kapillar-hævert 20 nL – 1 µL Piezoelektrisk overflytning 0,5 nL – 10 µL Antal brøndeVolumen af tilsætninger (µL) 965 – 100 384 5 – 50 15360,5 – 3
11
Overførsel af små volumener (nL) Skal tage højde for ▫Overfladespænding, diffusion, fordampning ▫Uensartethed i tippens åbningsstørrelse ▫Viskositet (temperatur)
13
Detektions Teknologier Primære detektions metoder ▫Fluorescens FLIPR FI TR-FRET FP ▫Luminescens Glow Flash Electrochemiluminescens ▫Radiometric Filterbinding ▫Absorbance
14
Detektions Teknologier Plate readers ▫Baseret på photomultiplier tubes (PMT) Meget sensitive lys detektorer ▫Pladen bevæges under detektoren ▫Lys kilde Tungsten Lasers Bedre sensitivitet LED Billig Specific bølgelængde ▫Bølgelængde Fixed Filtre valgt for specifikke prober Variabel ▫Multimode Kan aflæse ”alle” detektor metoderne Fordel: Kan nøjes med én ▫Plads ▫Billigere Ulemper Sensitivitet kan blive svækket
15
Detektions Teknologier Plate Imagers ▫Makro Afkølede (- 100 grader) CCD 2D billede forstærker/foton tæller Begge aflæser alle brønde eller del af pladen simultant. Frame rate Afkølede CCD ▫Kræver længere eksponering / langsom ”frame-rate” Foton tæller ▫Hurtig ”frame-rate”, men kræver behandlingstid
16
Detektions Teknologier Plate Imagers ▫Mikro High Content screening (HCS) Detaljerede information om molekylære forløb ▫Forståelse af ”drug” kandidater Flere billeder pr. plade brønd ▫Forstørrelse Fordel ▫Tillader automatisering af targets der hidtil var umulige at screene. ▫Reducere udgifter til celle baseret assays ▫Simplere design af disse ▫Måle flere ting på en gang (virkningsgrad, giftighed, specificitet) ▫Er blevet optimeret bedre forståelse af ”false positives” Ulemper ▫Kræver lagre plads og bedre software
17
Detektions Teknologier Plate Imagers Mikro HCS detektion Laser scanners ▫Origin: fluorescens cell sorting ▫Rekonstituere billeder (pseudo) ▫God til hele celle og bead analyse CCD imagers ▫Origin: fluorescens mikroskop ▫Fra automatiseret mikroskop plade læsere til langt mere advanceret systemer ▫Kan zoome ind til høj opløsning
18
Detektions Teknologier Plate readers Vs. Plate Imagers ▫Fordele Højere sensitivitet Billigere i drift Mindre ▫Ulemper Langsommere ved ”høj densitets” plader Normalisering kan være nødvendigt
19
Detektions Teknologier Andre ▫Dispense and read devices Vigtige for målinger af aktivitet efter tilførelse af væske Generelle fejlkilder ▫Crosstalk ▫Volume effekter Luft bobler Ridser Lys spredning
20
Robotstyring
21
Traditionel arbejdsstation ▫Enkle og simple funktioner Specifikke og effektiv ▫Plate reader eller væske håndtering ▫Pladerne bliver flyttet manuelt Robotbehandling af prøver ▫Fra 1 pipette til 4 og 8 kanals pipetter ▫Mere mobile ▫Udviklet til advanceret systemer Væske håndteringssystem Fuldt autmatiseret Plade opbevaring ▫”Hoteller” Fra simpel plade opbevaring Til advanceret systemer Karrusel opbygning Automatisk stregkode Temperatur/fugtigheds kontrol ▫”Plate Stacker” Lodrette stabler Først ind – først ud system Plade overførsel ▫Simple - begrænset til 2 akser ▫”high-tech” – hurtigere, større fleksibilitet.
22
Robotstyring Fuld integreret robotsystemer ▫Samling af forskellige arbejdsstationer ▫Robot arm sørger for flytte pladerne mellem dem ▫Software kontrollet ”turn-key” systemer ▫Klar til brug ▫Leveres komplet med valideret protokoler og software
Lignende præsentationer
© 2024 SlidePlayer.dk Inc.
All rights reserved.