Detektion af HIV med hhv

Præsentationer af emnet: "Detektion af HIV med hhv"— Præsentationens transcript:

1 Detektion af HIV med hhv
Detektion af HIV med hhv. ELISA og GPAT (gelatin partikel agglutinations test) Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

2 Disposition: Teori: Materiale/Metode: Resultater: Diskussion:
Retrovirus/Lentivirus ELISA GPAT Materiale/Metode: Kriterier Gennemgang af PubMed søgning Præsentation af artikler Resultater: Resultatskema Diskussion: Konklusion: Statistik i Danmark: Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

3 Problemformulering: ”Hvilken af de to følgende tests, gelatin partikel
agglutinationstest (GPAT) eller ELISA, opnår den højeste specificitet, sensitivitet og er mest økonomisk til at påvise HIV antistoffer i blodet?" Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

4 Teori Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

5 (Human Immunodeficiency Virus)
HIV-familie: (Human Immunodeficiency Virus) Retrovirus (-viridae): RNA-virus. Danner revers transcriptase. RNA  DNA. Enzym integrase. DNA integreres i cellens eget DNA. Produktion af nye viruspartikler. ”Skjuler” sig for immunforsvaret. problem_spaces/hiv/ Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

6 HIV-art: Lentivirus: Gruppe af såkaldt kompleks retrovirus.
Effektivt til at inficere: Ikke-delende celler Delende celler. HIV udvikler sig hurtigt: Ved at mutere og derved ændre udseende Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

7 ELISA: (Enzym-Linked Immunosorbent Assay)
Bruges til påvisning af antistoffer. Efter 3 måneder Påviser anti-p24 Direkte sandwich Coatning af brønd med primært antistof. Blokering. Prøve tilsættes. Antistofkonjugat tilsættes. Substrat tilsættes. Reaktion stop. Absorbans måles. BiologyPages/E/Elisa.html Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

8 GPAT: Binding mellem antigener og antistoffer.
Bindes til en partikel (latex). Specifikke antigen-antistofbindinger. Styrken af bindingerne og hastigheden afh. mængden af antistof. Foretages manuelt. Der kan foretages en rensning af serum. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

9 Materiale og metode Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

10 Materiale og metoder: Søgemaskiner: Kriterier: PubMed SweMed+ EMBASE
Web of Science Blackwell Synergy Scirus Google scholar Kriterier: Maksimalt 10 år gamle Metodesammenligning mellem GPAT og ELISA eller anden metode Søgning foretaget to gange Søgte efter citerende artikler Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

11 Eks. på søgning i PubMed:
Søgeord: ”HIV” Resultater: poster, reviews. Handling: Max 10 år gamle. PMID: Titel: Validation of a simple … Forfatter: Mashange et al, 2003 Søgeord: ”HIV and ELISA” Resultater: 2406 poster, 72 reviews. Handling: Max 10 år gamle. Søgeord: ”HIV and ELISA and GPAT” Resultater: 1 post. Handling: Max 10 år gamle. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

12 Hele søgningen i PubMed:
Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

13 Præsentation af artikler:
Metode sammenligninger: Mashange et al: GPAT vs. ELISA Poljak et al: GPAT vs. EIA og Western Blot Huang et al: GPAT vs. ELISA og Western Blot Hong et al: Fortynding af GPAT vs. ufortyndet GPAT Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

14 Præsentation af artikler:
Andre artikler: Frank et al: HIV-hjemmetest i USA. Goodstein, J: HIV-hjemmetest i Danmark. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

15 Resultater Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

16 Metode: Mashange et al: Partiklerne er coatede med HIV-1 Ag
5 ml blod opsamles Prøverne blandes Aflæses dagen efter Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

17 Metode: Poljak et al: 3 forskellige coatninger
Prøverne tilblandes partiklerne i 3 brønde Aflæses efter 2 timer Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

18 Metode: Huang et al: Partiklerne er coatede med HIV-1 Ag
Tilsæt 20 µl af prøve Fortynd 2-fold Aflæses efter 2 timer Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

19 Metode: Hong et al: Modificering (S/LS)
Forskellige fortyndinger anvendt Partiklerne coatede med HIV-1 Ag Forskellige kriterier for hvert forsøg Kontrol på positive prøver Aflæses efter 6-48 timer Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

20 Resultater: Antal forsøg (n) Specificitet Sensitivitet Mashange et al
379 99,2 % 100 % Poljak et al 3311 99,97 % Huang et al 565 GPAT: 95,0 % ELISA: 21,6 % 99,5 % Hong et al 309 PA-LS : ? PA-S: 98,8 % PA-LS: 97.0 % PA-S: 100 % Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

21 Diskussion Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

22 Poljak et al vs. Mashange et al:
Hvorfor mindre usikkerhed på Poljak et al resultater i forholdet i Mashange et al? Antal prøver Poljak et al 3311 Antal prøver Mashange et al 379 Poljak et al 1 falsk positivt resultat Mashange et al 2 falsk positive resultater Poljak et al specificitet 99,97 % Mashange et al specificitet 99,2 % Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

23 Huang et al vs. Poljak et al:
Forskellen mellem Huang et al vs. Poljak et al: Huang et al fik i GPAT 10 falsk positive resultater Poljak et al kun 1 falsk positivt resultat Årsagen er ulemper ved GPAT Huang et al specificitet 95,0 % i GPAT (antal prøver 565) Poljak et al specificitet 99,97 % i GPAT (antal prøver 3311) Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

24 Huang et al vs. Poljak et al:
Huang et al fik i GPAT 1 falsk negativt resultat Poljak et al fik 0 falsk negative resultater Årsagen er ulemper ved GPAT Huang et al sensitivitet 99,5 % GPAT Poljak et al sensitivitet 100 % GPAT Huang et al specificitet 21,6 % i ELISA Høj-risiko gruppen Årsagen kan være ELISA’s affinitet Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

25 Mashange et al vs. Huang et al:
Forskellen i Mashange et al og Huang et al resultater skyldes de tidligere nævnte årsager: • Antal prøver (Mashange 379, Huang 565) • Falsk positive og falsk negative resultater Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

26 Konklusion: GPAT er ligeså sensitiv som ELISA.
Vi kan ikke sige om GPAT er ligeså specifik som ELISA. GPAT er billigere end ELISA. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

27 Statistik i Danmark: Pris for ELISA:
ca prøver gange ca. 300 kr. = kr. Pris for GPAT: ca prøver gange ca. 20 kr. = kr. Besparelse ved GPAT: kr. Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.

28 Camilla H. , Thomas L. , Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt
Camilla H., Thomas L., Nadia M. & Emel K. 5. semester projekt Bioanalytikeruddannelsen KBH.