PAS farvning (Periodsyre-Schiff)

Præsentationer af emnet: "PAS farvning (Periodsyre-Schiff)"— Præsentationens transcript:

1 PAS farvning (Periodsyre-Schiff)
Formål: Påvisning af PAS-positive elementer i væv

2 Fremgangsmåde: Afparaffinering 0,5% periodsyre 10 minutter
Rindende vand 2 minutter Schiff’s reagens 15 minutter Rindende vand 5 minutter Mayers sure hæmatein 2 minutter Dehydrering

3 Fremgangsmåde: Oxiderer nabostillede OH-grupper i glukogen.
Afparaffinering 0,5% periodsyre Rindende vand Schiff’s reagens Mayers sure hæmatein Dehydrering Oxiderer nabostillede OH-grupper i glukogen. Derved dannes aldehydgrupper.

4 Oxidation af OH-grupper:
Lyon, Hans: Farvning af væv på basis af covalente bindinger og redoxprocesser, Bioanalytikeruddannelsen København, 1998.

5 Fremgangsmåde: Afparaffinering 0,5% periodsyre Rindende vand
Schiff’s reagens Mayers sure hæmatein Dehydrering

6 Fremgangsmåde: Afparaffinering 0,5% periodsyre Rindende vand Schiff’s reagens Mayers sure hæmatein Dehydrering Schiff’s reagens laver kovalente bindinger til aldehydgrupper i glukogen.

7 Kovalent binding af Schiff’s reagens:
Aldehydgruppe fra glukogen Ny kovalent binding Schiff’s reagens

8 Fremgangsmåde: Afparaffinering 0,5% periodsyre Rindende vand Schiff’s reagens Mayers sure hæmatein Dehydrering Hæver pH hvorved sulfolfonsyregruppen til det centrale C-atom fraspaltes.

9 Fremgangsmåde: Kernefarvning med Al-hæmatein. Afparaffinering
0,5% periodsyre Rindende vand Schiff’s reagens Mayers sure hæmatein Dehydrering Kernefarvning med Al-hæmatein.

10 Al-hæmatein: Bindinger af ”delvist kompleks karakter”
Kompleksbindinger Phosforgruppe i DNA-kæde

11 Fremgangsmåde: Hæver pH til 7. Dette fraspalter en H+ fra hæmatein.
Afparaffinering 0,5% periodsyre Rindende vand Schiff’s reagens Mayers sure hæmatein Dehydrering Hæver pH til 7. Dette fraspalter en H+ fra hæmatein. Hæmatein skifter farve fra vinrød til blå.

12 Resultater: Glycoproteiner, neutrale proteoglycaner og glykogen – røde
Basofile granulocytter - røde Kerner - blå

13 Kontroller: Ved rutine farvning medtages ikke kontroller.

14 Kommentarer: Sure glycosaminoglykaner (GAG’er) danner ikke aldehydgrupper, da periodsyre frastødes af de mange negative ladninger.

15 Litteratur: Lyon, Hans: Farvning af væv på basis af covalente bindinger og redoxprocesser, Bioanalytikeruddannelsen København, 1998, side 3-8. Prentø, Poul: Vævsfarvning og farvningsmekanismer, Bioanalytikeruddannelsen København, 1998, side 35, Farveopskrift fra speciallab.