Trichrom-farvning (trichrom: tre farver)

Præsentationer af emnet: "Trichrom-farvning (trichrom: tre farver)"— Præsentationens transcript:

1 Trichrom-farvning (trichrom: tre farver)
Formål: Påvisning af bindevæv

2 Fremgangsmåde: Afparaffinering Kogning 10 minutter
Lillie Weigert’s jernhæmatein 10 minutter Rindende vand 5 minutter Picrinsyre/Orange G 1 minut Rindende vand 5 dyb Ponceau/syrefuchin-opløsning 3 minutter 1% fosforwolframsyre 1 minut 1% anilinblå i 1% eddikesyre 3 minutter Dehydrering

3 Fremgangsmåde: Åbner vævet op
Afparaffinering Kogning Lillie Weigert’s jernhæmatein Rindende vand Picrinsyre/Orange G Ponceau/syrefuchin-opløsning 1% fosforwolframsyre 1% anilinblå i 1% eddikesyre Dehydrering Åbner vævet op Intensivere farverne og fremhæve kontrasten mellem forskellige vævskomponenter.

4 Fremgangsmåde: Kernefarvning med jernhæmatein. Afparaffinering Kogning
Lillie Weigert’s jernhæmatein Rindende vand Picrinsyre/Orange G Ponceau/syrefuchin-opløsning 1% fosforwolframsyre 1% anilinblå i 1% eddikesyre Dehydrering Kernefarvning med jernhæmatein.

5 Jernhæmatein Kompleksbindinger
Bindinger af ”delvist kompleks karakter” Phosforgruppe i DNA-kæde

6 Fremgangsmåde: Hæver pH til 7. Dette fraspalter en H+ fra hæmatein.
Afparaffinering Kogning Lillie Weigert’s jernhæmatein Rindende vand Picrinsyre/Orange G Ponceau/syrefuchin-opløsning 1% fosforwolframsyre 1% anilinblå i 1% eddikesyre Dehydrering Hæver pH til 7. Dette fraspalter en H+ fra hæmatein. Hæmatein skifter farve fra vinrød til blå.

7 Fremgangsmåde: Anionfarvestoffer.
Afparaffinering Kogning Lillie Weigert’s jernhæmatein Rindende vand Picrinsyre/Orange G Ponceau/syrefuchin-opløsning 1% fosforwolframsyre 1% anilinblå i 1% eddikesyre Dehydrering Anionfarvestoffer. Farvestoffernes molekylestørrelse og vævets gennemtrængelighed er afgørende for hvilke vævskomponenter der bliver farvet og af hvilke farvestoffer de farves.

8 Farvestoffer: Bindes til proteiner ved
hydrofob interaktion upolære bindinger hydrogenbindinger ionbindinger Phosperwolframsyre ligger sig omkring proteintråde i cytoplasma, herved er det kun kollagen, der farves af anilinblå

9 Resultater: Kollagene og retikulære tråde – blå Fibrin – orangerødt
Erythrocytter – gule Muskler – røde Kerner - blårøde

10 Kontroller: Der anvendes rutinemæssigt kontrolsnit.
Leversnit til leverfarvninger Tarm når der farves i øvrigt.

11 Kommentarer: Alternativ til mikrobølger er forbehandling i Bouins fixsativ natten over. Det fungerer som en form for sekundær fiksering, som skulle intensivere farverne og dermed fremhæve kontrasten mellem forskellige vævskomponenter.

12 Litteratur: Lyon, Hans: Farvning af væv på basis af covalente bindinger og redoxprocesser, Bioanalytikeruddannelsen København, 1998. Farveopskrift fra speciallab.